新型试纸10秒测出西红柿病毒 适用于田间大批量检测

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将一片西红柿叶子在滴管里挤出汁液，并适当加水稀释，然后轻轻放入一片试纸条，大约10秒之后，该纸条上清晰地出现了两道暗红色的横条，这是该叶子感染了番茄褐色皱果病毒（tomato brown rugose fruit virus，简称ToBRFV）的标志。
　　这一幕是在山东农业大学植物病毒学研究室发生的。近日，科技日报记者来到该实验室时，实验室负责人、植物病毒学专家李向东教授告诉记者：“这是我们实验室刚刚制备的番茄褐色皱果病毒试纸条。相对于其它检测手段，它灵敏度高、特异性强、使用方便、操作简单，非常适合田间大批量样品检测，对病毒的精准监测及早期预警有重要作用。”
　　番茄褐色皱果病毒是一种新发病毒，可通过种子、接触以及熊蜂传播，严重威胁番茄的安全生产。ToBRFV首先报道于约旦、以色列，随后相继在美洲、欧洲、非洲等国家出现，引起国际上广泛重视，多个国家将其列入检疫对象。
　　今年4月9日，我国农业农村部和海关总署联合发布的《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》也将ToBRFV列为检疫对象。
　　快速鉴定及早期预警对ToBRFV的防治十分关键。目前的ToBRFV检测方法包括多重PCR、荧光定量等，均需要精密仪器或专业的操作人员。而李向东实验室研制的胶体金免疫试纸条操作简单，可在几秒或者几分钟内通过肉眼观察进行判断，对于田间检测十分适用。
　　据李向东介绍，他们实验室以ToBRFV粒子为免疫原，通过杂交瘤技术制备了17株抗ToBRFV的单抗，将2个单抗分别固定于胶体金垫和硝酸纤维素膜上进行组合，制备胶体金试纸条，获得272个配对组合。通过特异性测定，筛选到一组配对抗体制备的试纸条。试纸条可从稀释12800倍的番茄叶片病汁液中（含约8微克番茄叶片）检测到ToBRFV，快速而且灵敏，而与其它同属烟草花叶病毒属、氨基酸一致率超过85%、同样侵染番茄的番茄斑驳花叶病毒、番茄花叶病毒等毫无反应。
　　“我们同时在辣椒上做了实验，结果同样理想。目前，该成果已经申请国家发明专利，并被山东、河北、河南、江苏、安徽等地农技推广部门和企业试用。”李向东说。